一、项目简介
检测项目：Septin9基因甲基化DNA检测（结直肠癌）标本采集：血浆试验方法学：PCR荧光法收费标准：北京收费元；河北收费元项目
河北收费北京收费Septin9基因甲基化DNA检测（结直肠癌）元元（甲）报告时间：周二、周四下午三点
项目中心实验室分子组/-二、临床背景介绍1、结直肠癌现状结直肠癌（colorectalcancer，CRC）是起源于结直肠黏膜上皮的恶性肿瘤，是临床最常见的恶性肿瘤之一。年，美国癌症学会预计结直肠癌在美国男、女性新发病例和死亡病例中位居第三位。我国每年结直肠癌新发病例超过25万，死亡病例约14万，新发和死亡病例约占全世界同期结直肠癌病例的20%。年《中国大肠癌流行病学及预防和筛查白皮书》显示，结直肠癌居恶性肿瘤发病率第三位，死亡率居第五位。因此，降低我国结直肠癌的发病率和死亡率是刻不容缓的重大临床科学问题。
结直肠癌的转归及预后与病变的分期紧密相关。局部进展期结直肠癌五年癌症相关生存率为70%，而发生远处转移的晚期结直肠癌患者五年生存率仅12%，且患者生活质量低。然而，大部分结直肠癌可获得良好预后，五年生存率超过90%，部分可行内镜微创治疗获得根治。但是目前我国结直肠癌的早期发现率较低，明显低于欧美国家。因此，逐步普及方便快捷、依从性强的结直肠癌筛查方法，是提高我国结直肠癌早期发现、让患者得以及早治疗、降低结直肠癌相关死亡率的有效途径。
2、现有结直肠癌检查方法和存在的问题
影像学检查和便潜血检查是结直肠癌的重要筛查方法；肠镜检查因其具有较强的侵入性，不可能作为大规模开展的筛查方法，而是应用于结直肠癌的诊断。这三种方法在开展便宜度、患者接受度和依从性、检测灵敏度等多个方面都存在缺陷，见表1。
表1三种检测方法比较
影像学
便潜血
肠镜/活检
发现肿瘤时期
中晚期
中晚期
早期至晚期
灵敏度
低
中低
金标准
特异性
中低
中低
金标准
便捷度
较便捷
患者自取样，操作规范性难以保证。患者接受度不高、依从性差。
复杂，需医师专业操作，且需要受检者严格配合。检查前需要患者做禁食、清肠等准备。检查时患者非常痛苦，患者接受度较低。
临床应用
筛查和监控
筛查
诊断
侵入性
无。
但有放射性
无
高
作为结直肠癌的筛查方法，除了应用于临床辅助诊断外，还能满足于体检的筛查方法。受检者依从性高、采样方便、易于规范、患者无痛苦、无恐惧等特点。最好的筛查项目是同时能应用于临床和体检的筛查项目，鉴于此，运用分子生物学方法Septin9基因甲基化DNA在结直肠癌检测方法优于以上检测手段。
三，技术背景介绍
1，DNA甲基化与肿瘤发生的关系
近年来表观遗传学的研究进展飞速，特别是DNA甲基化的研究尤为深入。研究发现，在肿瘤发生早期就存在很多特有的肿瘤相关基因（包括癌基因和肿瘤抑制基因）甲基化程度的改变，这为肿瘤早期检测标志物的探索提供了新的契机。
DNA甲基化（DNAmethylation）是指DNA启动子区域的CpG双核苷中的胞嘧啶（C）处于甲基化状态，能引起染色质结构及稳定性等发生改变，从而调控基因的转录和表达。DNA甲基化的异常是很多肿瘤发生的里程碑事件，在肿瘤形成的早期即会发生，因此成为肿瘤早期检测的理想标志物[6,7]。
在正常细胞中，基因组60%～90%的CpG是被甲基修饰的；而肿瘤细胞中甲基化水平比正常细胞低20%～60%，且随甲基化程度的降低，恶性程度呈增高趋势。肿瘤细胞总的表现特征为广泛的低甲基化（总基因组DNA、癌基因处于低甲基化）和局部CpG岛的高甲基化（肿瘤抑制基因处于高甲基化）。低甲基化会激活基因转录，而高甲基化会抑制基因转录导致基因沉默。因此，DNA甲基化可以作为一种新型肿瘤标志物用于肿瘤的早期检测、患病风险预测等。
2、Septin9基因甲基化与结直肠癌的关系由于现有的结直肠癌检查方法不能满足人们在筛查中的要求，大家开始将目光转向结直肠癌的分子标志物。Lofton-Day等研究发现，在结直肠癌患者组织中Septin9基因的启动子区域CpG岛的胞嘧啶发生甲基化，而正常组织不发生甲基化，其可作为潜在的检测结直肠癌的血液标志物。
Septin9基因编码GTP-结合蛋白，主要功能是和细胞凋亡及细胞分裂有关。Septin9基因属肿瘤抑制基因，发生甲基化后将导致细胞分裂异常和癌变，如前所述，在结直肠癌中Septin9启动子区的CpG岛高度甲基化，可通过检测血液中Septin9基因甲基化情况进行结直肠癌（colorectal
cancer，CRC）的早期筛查，如下图所示。
3、Septin9用于结直肠癌早期筛查已写入指南寻找外周血结直肠癌特异性分子标志物对于提高受检者筛查依从性有重要意义，甲基化Septin9基因是结直肠癌早期发生发展过程中的特异性分子标志物，血浆Septin9DNA甲基化检测的应用已明确写入《中国早期结直肠癌筛查及内镜诊治指南》。4、Septin9基因甲基化检测的技术路线透景Septin9基因甲基化DNA检测结合了亚硫酸盐修饰和Taqman探针两种技术。利用亚硫酸盐使未甲基化的C碱基转换为U碱基，在PCR扩增过程中，再转换为T碱基，而甲基化的C碱基保持不变，由此可以区分甲基化和未甲基化的C碱基。利用Taqman探针对扩增产物进行检测，通过优化的反应体系和高度特异Taq酶的使用，在实时荧光PCR平台上实现对样品中甲基化DNA的特异检测。所用试剂盒采用多色荧光检测体系设计，FAM荧光检测Septin9基因甲基化状态，CY5荧光检测内参基因。四、建议Septin9基因甲基化检测人群
1、体检人群（符合任一情况）：常规体检筛查或有临床症状的人群（如腹部包块、便血、腹痛、大便习惯和形状性状改变等）；长期患有溃疡性结肠炎的患者；疑似有增生性肠道疾病者；抵触直接行肠镜检查者；有肠道疾病家族史者；2、消化疾病患者：肠镜前置检查，用于门诊病人的检查；消化道肿瘤、息肉病人的肠镜后复查。编辑：王宝喜
审校：王欣俞
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